什么是層析
層析基于不同物質在活動相和固定相之間的分配系數不同而將混合組分別離的技能。當活動相（液體或氣體）流經固定相（多孔的固體或掩蓋在固體支持物上的液體）時，各組分因沿固定相移動的速度不同而別離。該技能可用于微量樣品的剖析和大量樣品的純化制備。
層析（chromatography）也稱色譜法?；诒粍e離物質分子在兩相（一為固定相，一為活動相）中分配系數的細小差別進行別離，是一種多級別離技能。當兩相做相對移動時，被測物質在兩相之間進行重復屢次別離，使原來細小的分配差異進一步擴大，使各個組分別離。這一別離方法效率高、效果好，能將各種性質極相似的物質彼此別離。
層析（chromatography）可分為多品種型。依據移動相品種的不同，分為液體層析（chromatography）、氣體層析（chromatography）兩種。用作固定相的有硅膠、活性炭、氧化鋁、離子交換樹脂、離子交換纖維等，或是在硅藻土、纖維素等無活性的載體上附著適當的液體，也可使用其他物質。
層析（chromatography）是蛋白質別離純化的重要手法之一。一般來說，待別離蛋白質溶液（活動相）經過一個固態物質（固定相）時，依據溶液中待別離的蛋白質顆粒巨細、電荷多少以及親和力如何等，使待別離的蛋白質溶液在兩相中重復分配，并以不同速度流經固定相而達到別離蛋白質的意圖。
分子篩層析又是什么，以及分子篩層析的工作原理
在蛋白質別離純化中，使用最廣的層析法是離子交換層析和分子篩層析。
一、離子交換層析。蛋白質和氨基酸相同，是兩性電解質，在某一特定pH時，各蛋白質的電荷量以及性質不同，能夠通過離子交換層析得以別離。
二、分子篩層析。又稱凝膠過濾或體積排阻層析。層析柱內填滿帶有小孔的顆粒，一般由葡聚糖制成。蛋白質溶液加于柱之頂部，任其往下滲漏，小分子蛋白質進入孔內，因而在柱中滯留時間較長，大分子蛋白質不能進入孔內而徑直流出，因此不同巨細的蛋白質得以別離。
分子篩層析是使用有必定孔徑規模的多孔凝膠作為固定相。對混合物中各組分按分子巨細進行別離的層析技能。具有分子篩效果的物質許多，如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。以葡聚糖凝膠使用最廣，商品名是sephadex類型許多，從G10到G200，它的首要使用規模是：
①分級別離各種抗原與抗體；
②去掉復合物中的小分子物質。如除鹽、熒光素和游離的放射性同位素以及水解的蛋白質碎片；
③剖析血清中的免疫復合物；
④分子量的測定。
分子篩層析柱的選擇一般依據別離樣品的品種和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的25～100倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響別離效果。柱長一些，別離效果好，但柱太長，則延長別離時間，樣品也稀釋過度。分子篩層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會產生“器壁效應”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響別離效果。所以分子篩層析柱的內徑和高度應有必定的份額。對于除鹽來說應為1︰5～1︰25；對于純化蛋白質來說應為1︰20～1︰100。
分子篩層析的裝柱進程基本同離子交換層析柱。
